Contribution à l'étude de l'export du microARN miR-503 dans les vésicules extracellulaires

Abstract

L’angiogenèse est un processus essentiel au développement tumoral, ce qui en fait une cible de choix dans la recherche de nouvelles thérapies dans la lutte contre le cancer. Les miARN régulent une grande variété de processus tels que l’angiogenèse. Leur présence dans la plupart des fluides biologiques offre de nouvelles perspectives d’un point de vue diagnostic et thérapeutique. Ces miARN circulants sont transportés par de petites vésicules extracellulaires, les exosomes, qui interviennent dans la communication intercellulaire. Notre laboratoire s’est intéressé à la communication entre les cellules endothéliales et les cellules tumorales. Un miARN a été identifié comme présentant des caractéristiques anti-tumorales, miR-503. Le niveau de ce miARN dans les exosomes de cellules endothéliales cultivées dans un environnement tumoral diminuait. A l’inverse, en présence d’un agent chimiothérapeutique, l’Epirubicine, il augmentait. Récemment, notre laboratoire a identifié, par spectrométrie de masse, neufs protéines partenaires de miR-503 pouvant être impliquées dans son export. Au cours de ce travail, nous avons étudié la distribution des protéines identifiées au sein du complexe qu’elles forment avec miR-503. Certaines protéines étaient en interactions directes avec miR-503. Par des expériences d’hybridation in situ, nous avons été en mesure de détecter miR-503. Nous avons également démontré, à l’aide de qRT-PCR et de Western blotting, que l’expression des protéines identifiées variait lors du traitement à l’Epirubicine. Nous nous sommes ensuite intéressés aux effets de l’agent chimiothérapeutique sur la localisation des protéines en interaction avec ce miARN. Nous avons réalisé des analyses de microscopie à fluorescence et de fractionnement cellulaire sur des cellules endothéliales traitées ou non avec l’Epirubicine. Nous avons constaté que la localisation de deux protéines différait de la condition basale. En cherchant à approfondir ces résultats, nous avons co-localisé ces deux protéines avec un marqueur endosomal afin de déterminer l’effet de l’Epirubicine sur leur incorporation dans les endosomes. Nous avons constaté que le traitement affectait l’entrée de ces protéines dans les endosomes précoces. Ce projet de recherche a également abordé la thématique de la communication entre les cellules endothéliales et tumorales. Nous avons produit des lignées de cellules endothéliales et tumorales exprimant un marqueur exosomal ou un marqueur membranaire. Nous avons ensuite analysé le transfert d’exosomes entre ces deux lignées par des systèmes de co-cultures. Malgré la présence de vésicules autofluorescentes, nous avons observé un transfert de petites vésicules fluorescentes entre les deux types cellulaires.